Paket Lengkap Verbal Prethrombin-2 Manusia Recombinan Dalampichia Pastoris Dan Optimasi Kondisi Ekspresinya
4:19 PM
Edit
Abstrak: Pretrombin merupakan prekursor dari trombin yang memiliki program proteolitik. Trombin merubah fibrinogen menjadi benang fibrin yang salah satu aplikasinya yakni mampu digunakan sebagai lem untuk menggantikan teknik jahitan pasca bedah. Aplikasi trombin untuk pembuatan lem fibrin menuntut diproduksinya trombin rekombinan. Tujuan dari penelitian ini yakni verbal gen pretrombin-2 (PT2) manusia rekombinan menggunakan sistem verbal Pichia pastoris. Gen pengode PT2 dirancang sesuai dengan kodon preferensi P. pastoris. Fragmen PT2 diamplifikasi dengan metoda PCR dengan penambahan sisi restriksi EcoR1 pada ujung 5’ dan sisi restriksi SacII pada ujung 3’. Produk PCR yang berukuran 924 pb diligasi dengan vektor verbal pPICZaB untuk P. pastoris dan disubkloning dalam inang Escherichia coli. Urutan nukleotida dikonfirmasi dengan metoda dideoxy Sanger. Plasmid rekombinan pPICZaB-PT2 kemudian digunakan untuk mentransformasi P. pastoris SMD1168 defisien protease dengan metoda elektroporasi. Hasil penelitian menawarkan bahwa gen PT2 berhasil diamplifikasi dan dikloning dalam E. coli. Analisis restriksi dan penentuan urutan DNA menawarkan bahwa PT2 rekombinan 100% homologi dengan hasil rancangan. Hasil verbal PT2 oleh P. pastoris menggunakan metanol sebagai inducer menawarkan bahwa PT2 dengan berat molekul 35 kDa berhasil diekspresikan. Optimasi kondisi verbal melalui variasi konsentrasi metanol sebagai inducer dan sorbitol sebagai sumber karbon pemanis menawarkan bahwa metanol 2% dan sorbitol 2% merupakan kondisi optimum verbal PT2.
Kata kunci: Pretrombin-2, trombin, Pichia pastoris, kondisi ekspresi
Penulis: Shabarni Gaffar, Purba Upay, Iman Permana Maksum, Khomaini Hasan, Toto Subroto, Sutarya Enus, Soetijoso Soemitro, Wulan Pertiwi
Kode Jurnal: jpfarmasidd170584
Sumber https://fisikamilenial.blogspot.com/
